【研究背景】

隨著工業(yè)化學的迅速發(fā)展，新型環(huán)境污染物對人類健康和生態(tài)系統(tǒng)的影響日益顯著。塑料制品因其輕便、耐用和低成本的特性被廣泛應用于各行各業(yè)，但塑料增塑劑的潛在健康危害逐漸受到關注。乙酰三丁基檸檬酸酯（ATBC）作為一種新興的增塑劑，在塑料制造業(yè)中占據(jù)重要地位，尤其是在獲得歐盟批準用于食品接觸材料后，其使用更加廣泛。然而，越來越多的證據(jù)表明ATBC可能通過內(nèi)分泌干擾和代謝改變等機制對健康造成威脅，且其信號通路與癌癥的發(fā)生和發(fā)展相關。鑒于此，本研究旨在探討ATBC與口腔鱗狀細胞癌（OSCC）之間的關聯(lián)，以期為評估環(huán)境健康風險提供科學依據(jù)，并為制定相關防護策略奠定基礎。

【研究方法】

研究整合了網(wǎng)絡毒理學、分子對接和分子動力學模擬等多種方法。首先，通過ProTox-3.0、ADMETlab 3.0和ChemBlink數(shù)據(jù)庫對ATBC進行毒性分析，并從PubChem數(shù)據(jù)庫獲取ATBC的SMILES序列。隨后，利用Swiss Target Prediction、ChEMBL和TargetNet數(shù)據(jù)庫以及STITCH數(shù)據(jù)庫預測ATBC的潛在靶標，并通過UniProt數(shù)據(jù)庫標準化靶標名稱，構建ATBC的靶標庫。同時，從GeneCards、OMIM和TTD數(shù)據(jù)庫收集OSCC相關靶標，通過Venn網(wǎng)站確定化合物靶標與疾病靶標的重疊部分，作為ATBC誘導OSCC的潛在靶標。接下來，利用STRING12.0數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.9.1軟件構建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡，并通過CytoNCA插件篩選核心靶標。使用DAVID數(shù)據(jù)庫對交集靶標進行GO和KEGG通路富集分析。此外，從NCBI中GEO數(shù)據(jù)庫獲取GSE74530數(shù)據(jù)集，識別OSCC組織與正常對照組織之間的差異表達基因（DEGs），并與ATBC相關靶標進行交集分析。最后，利用AutoDock Vina進行分子對接實驗，模擬ATBC與核心靶標的結合模式，并使用Gromacs軟件對蛋白-ATBC復合物進行分子動力學模擬，以評估結合的穩(wěn)定性和可靠性。

【研究結果】

n 毒理學分析

通過ProTox-3.0、ADMETlab3.0和ChemBlink數(shù)據(jù)庫對ATBC進行毒理學評估，結果表明ATBC具有致癌性，且對皮膚和眼睛有顯著的刺激潛力，但對內(nèi)臟器官的毒性不明顯。

n ATBC誘導OSCC的潛在靶標識別

從GeneCards、OMIM和TTD數(shù)據(jù)庫共收集到2018個潛在的OSCC相關靶標，同時從ChEMBL、TargetNet、Swiss Target Prediction和STITCH數(shù)據(jù)庫以及相關文獻中確定了445個ATBC相關靶標。通過Venn圖分析，發(fā)現(xiàn)107個共同靶基因，這些基因可能在ATBC與OSCC的相互作用中發(fā)揮關鍵作用。

n PPI網(wǎng)絡構建與核心靶標篩選

基于STRING數(shù)據(jù)庫構建的PPI網(wǎng)絡包含106個節(jié)點和1483條邊。利用CytoNCA插件進一步分析網(wǎng)絡節(jié)點的拓撲特征，篩選出22個核心靶標，包括AKT1、MMP2、BRAF、HSP90AA1、CASP8、SIRT1、MAPK14、GSK3B、AR、CREBBP、MAPK1、ESR1、CASP3、BCL2、PPARG、MMP9、EGFR、ERBB2、MAPK3、PARP1、MDM2和NR3C1，這些蛋白在多種生物過程中發(fā)揮著重要作用，可能是ATBC誘導OSCC分子機制的關鍵調(diào)控因子。

n GO和KEGG通路富集分析

對107個潛在靶標進行GO富集分析，發(fā)現(xiàn)ATBC誘導的OSCC主要涉及蛋白磷酸化、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、細胞群體增殖的正調(diào)控、凋亡過程的負調(diào)控、基因表達調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導等生物過程，以及細胞質(zhì)、核質(zhì)、受體復合體、細胞核、染色質(zhì)和含蛋白復合體等細胞組分，同時還與核受體活性、蛋白結合、ATP結合和肽酶活性等分子功能密切相關。KEGG通路分析顯示，這些靶標與癌癥信號通路、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化、化學致癌-受體激活以及PI3K-Akt信號通路等153條不同通路相關，表明ATBC對細胞信號網(wǎng)絡的廣泛影響。

n OSCC中的DEGs鑒定

對GSE74530數(shù)據(jù)集分析發(fā)現(xiàn)，與健康對照相比，OSCC患者中有1820個上調(diào)基因和685個下調(diào)基因。通過Venn分析，發(fā)現(xiàn)ATBC靶基因與GSE74530數(shù)據(jù)集中的DEGs之間存在50個重疊基因，其中MMP9、AR、MAPK3、MMP2、PARP1和ERBB2等基因在ATBC誘導的致癌機制中具有關鍵作用。

n 分子對接驗證

對ATBC與基于度中心性排名前八的核心靶標（AKT1、HSP90AA1、ESR1、CASP3、BCL2、PPARG、MMP9和EGFR）進行分子對接分析，結果顯示這些核心蛋白均與ATBC具有較高的結合親和力，結合能分別為：MMP9（?7.1 kcal/mol）、HSP90AA1（?6.4 kcal/mol）、BCL2（?6.3 kcal/mol）、EGFR（?6.3 kcal/mol）、AKT1（?6.1 kcal/mol）、PPARG（?5.3 kcal/mol）、ESR1（?5.2 kcal/mol）和CASP3（?5.1 kcal/mol）。

n 蛋白-配體復合物的分子動力學模擬

對EGFR-ATBC、HSP90AA1-ATBC和MMP9-ATBC復合物進行分子動力學模擬，結果顯示三個復合物均達到平衡狀態(tài)，其中HSP90AA1-ATBC復合物最為穩(wěn)定。RMSD值顯示蛋白復合物的RMSD一般在0.1-0.3nm之間，配體的RMSD在0.02-0.1nm之間，表明復合物內(nèi)結合緊密。RMSF分析顯示MMP9-ATBC和HSP90AA1-ATBC復合物整體波動較小，RMSF值保持在1 nm以內(nèi)，而EGFR-ATBC復合物在大約750、870和1100位殘基處出現(xiàn)明顯峰值，提示這些區(qū)域的靈活性增加，可能有助于配體相互作用，促進功能發(fā)揮。氫鍵數(shù)量變化分析表明，在三次獨立的分子動力學模擬中，配體與三種蛋白之間形成的氫鍵數(shù)量在0-2個之間，其中MMP9與ATBC形成氫鍵的頻率高于其他兩種蛋白，暗示MMP9可能與ATBC形成更強或更穩(wěn)定的相互作用。吉布斯自由能景觀分析進一步揭示了配體-受體相互作用的能量特性和構象變化路徑，低能量的構象狀態(tài)主要集中在藍色和綠色區(qū)域，代表穩(wěn)定構象，而紅色區(qū)域?qū)吣芰繝顟B(tài)。ATBC與三個蛋白受體結合時，相應的PC1值在0.0-0.3之間，與復合物的RMSD曲線相結合，進一步證實了ATBC-蛋白質(zhì)受體結合的高穩(wěn)定性。結合自由能計算結果顯示，ATBC-EGFR復合物的結合自由能最低（?43.46 kcal/mol），其次是ATBC-HSP90AA1（?38.80 kcal/mol）和ATBC-MMP9（?35.50 kcal/mol），且總結合自由能為負值，表明ATBC與大分子的結合在熱力學上是有利的，疏水效應和靜電相互作用是主要的驅(qū)動力。

【研究結論】

本研究通過結合網(wǎng)絡毒理學、分子對接和分子動力學模擬，為理解ATBC可能如何促進OSCC的發(fā)展提供了機制上的認識。研究揭示了ATBC的多方面生物相互作用，并確定了可能驅(qū)動致癌過程的關鍵分子靶標和通路。這些發(fā)現(xiàn)不僅加深了我們對ATBC毒理學特征的理解，還為環(huán)境風險評估提供了關鍵證據(jù)，特別是在塑料增塑劑的廣泛應用方面。未來的研究應探討塑料增塑劑暴露與其他口腔病理學之間的關聯(lián)，如口腔白斑和口腔黏膜下纖維化，以增強對塑料增塑劑相關健康風險的全面評估，并指導政策決策，朝著更安全的環(huán)境方向發(fā)展。

Guo Y, Liu Y, Chen Y, Du S, Zheng Y, Wang L. The mechanisms of environmental pollutant acetyl tributyl citrate induced oral squamous cell carcinoma using network toxicology, molecular docking and molecular dynamics simulation. Int J Surg. 2025 Jul 24. doi: 10.1097/JS9.0000000000002967. Epub ahead of print. PMID: 40705527.